Användning och försiktighetsåtgärder för ultrafiltreringscentrifugrör
1) Välj ett lämpligt ultrafiltreringsrör.Observera att UF-membran skiljer sig i sin toleransnivå för olika kemikalier.Typiskt kan ultrafiltreringsrör med en molekylviktsgräns på 10 kDa väljas med en molekylviktsgräns som inte bör vara större än 1/3 av molekylvikten för proteinet av intresse, såsom 35 kDa.Om molekylvikten för proteinet av intresse är omkring 10 kd kan ett ultrafiltreringsrör med en molekylviktsgräns på 3 KD användas.
(2) Ultrafiltreringen, nyköpt, är torr, med ultrarent vatten tillsatt före användning och vatten passerar helt genom membranet, isbadet eller kylskåpet förkylt i några minuter.Vattnet hälls sedan av, dvs proteinvätskan, och hur mycket som tillsätts, vilket som inte är mer än den vita linjen i toppen av röret.Operationen är lätt och ultrafiltreringsröret måste förkylas på is innan proteinlösningen tillsätts.
3) Både massan och tyngdpunkten skulle nå balansen.Observera att rotationshastigheten och accelerationen inte är särskilt snabb, annars skadar ultrafiltreringsmembranet direkt.Centrifugal ultrafiltrering påbörjades (centrifug förkyld till 4 grader).Efter att varvtalet för olika centrifuger omvandlats till g, var det annorlunda.Centrifugens acceleration justerades till ett minimum, vilket minskade trycket på membranet.Observera, se till att lämna centrifugen efter att centrifugen har nått sin destinationshastighet, eller om du har ett problem kan du inte hantera det för första gången.Orienteringen av membranet till spindeln justerades enligt instruktionerna (vinkelcentrifughöljet är vinkelrätt mellan membranet och axeln).Vid praktisk användning är den generella rotationshastigheten lägre än den i instruktionerna, så att livslängden på centrifugröret kan förlängas.
3) Både massan och tyngdpunkten skulle nå balansen.Observera att rotationshastigheten och accelerationen inte är särskilt snabb, annars skadar ultrafiltreringsmembranet direkt.Centrifugal ultrafiltrering påbörjades (centrifug förkyld till 4 grader).Efter att varvtalet för olika centrifuger omvandlats till g, var det annorlunda.Centrifugens acceleration justerades till ett minimum, vilket minskade trycket på membranet.Observera, se till att lämna centrifugen efter att centrifugen har nått sin destinationshastighet, eller om du har ett problem kan du inte hantera det för första gången.Orienteringen av membranet till spindeln justerades enligt instruktionerna (vinkelcentrifughöljet är vinkelrätt mellan membranet och axeln).Vid praktisk användning är den generella rotationshastigheten lägre än den i instruktionerna, så att livslängden på centrifugröret kan förlängas.
(4) När den är koncentrerad till de återstående 1 ml, ta 50 ul buffertlösning, tillsätt 10 ul genomflöde och se om det finns någon blå färg, som en bedömning om ultrafiltreringsröret saknar protein.Om röret är läckande, häll tillbaka det övre lagret och rinna igenom det i ett nytt rör för att starta ultrafiltrering.För att avgöra exakt om rören har missats, centrifugera i 10 minuter med 5 mg BSA före genomströmning, kör på proteinlim eller Bradford crude-analys och fortsätt genom att tillsätta den återstående koncentrerade proteinlösningen (som fungerar på is och förhindrar att proteiner värms upp) tills allt koncentrat har tillsatts.Var försiktig under centrifugeringen om utfällning av proteiner inträffar, vilket leder till att röret stängs.Om utfällning inträffar, avgör om den specifika orsaken till utfällningen är en överdriven proteinkoncentration eller en olämplig buffert;Den förra kan lösas genom ultrafiltrering av flera ultrafiltreringsrör samtidigt, minskning av koncentrationen, och den senare genom att byta ut olika buffertlösningar tills ingen utfällning av proteinet sker.
(4) När den är koncentrerad till de återstående 1 ml, ta 50 ul buffertlösning, tillsätt 10 ul genomflöde och se om det finns någon blå färg, som en bedömning om ultrafiltreringsröret saknar protein.Om röret är läckande, häll tillbaka det övre lagret och rinna igenom det i ett nytt rör för att starta ultrafiltrering.För att avgöra exakt om rören har missats, centrifugera i 10 minuter med 5 mg BSA före genomströmning, kör på proteinlim eller Bradford crude-analys och fortsätt genom att tillsätta den återstående koncentrerade proteinlösningen (som fungerar på is och förhindrar att proteiner värms upp) tills allt koncentrat har tillsatts.Var försiktig under centrifugeringen om utfällning av proteiner inträffar, vilket leder till att röret stängs.Om utfällning inträffar, avgör om den specifika orsaken till utfällningen är en överdriven proteinkoncentration eller en olämplig buffert;Den förra kan lösas genom ultrafiltrering av flera ultrafiltreringsrör samtidigt, minskning av koncentrationen, och den senare genom att byta ut olika buffertlösningar tills ingen utfällning av proteinet sker.
(5) De första stegen används för att koncentrera proteinet, och om bufferten ska bytas, tillsätt försiktigt ny buffert (ultrafiltrering genom ett 0,22um ultrafiltreringsmembran) till cirka 1 ml totalt protein och koncentrera om till cirka 1 ml i tre på varandra följande gånger, med den slutliga koncentrerade slutvolymen beroende på den önskade proteinkoncentrationen, i allmänhet inte mer än 500 ul, men också inom 200 ul.Uppnå 1000 × eller mer vid tre tillfällen, i stort sett lika mycket buffertförändring, som beräknat med minst 10 × eller så volymanrikning varje gång.
(5) De första stegen används för att koncentrera proteinet, och om bufferten ska bytas, tillsätt försiktigt ny buffert (ultrafiltrering genom ett 0,22um ultrafiltreringsmembran) till cirka 1 ml totalt protein och koncentrera om till cirka 1 ml i tre på varandra följande gånger, med den slutliga koncentrerade slutvolymen beroende på den önskade proteinkoncentrationen, i allmänhet inte mer än 500 ul, men också inom 200 ul.Uppnå 1000 × eller mer vid tre tillfällen, i stort sett lika mycket buffertförändring, som beräknat med minst 10 × eller så volymanrikning varje gång.
Posttid: 2022-nov-09